UPLC-MS/MS测定人痰液中异烟肼、吡嗪酰胺和左氧氟沙星的浓度

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时检测痰液中3种药物异烟肼(isoniazid,INH)、左氧氟沙星(levofloxacin,LFX)和吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)浓度的方法,冒在为实现临床个体化用药提供帮助。方法痰液样品离心后经甲醇/乙腈蛋白沉淀法预处理后进样液质联用仪进行分析。实验采用的流动相A为含0.1%甲酸的水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的乙腈;流速0.35mL·min^-1;采用ACQUITY UPLAC HSS T31.8μm column(2.1mm×100mm,Waters公司)分离;采用电喷零电离源,采用多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式对待测物进行正离子扫描检测。此外,本试验盲态收集5例患者的痰液,用该法进行定量分析。结果测得痰液中INH、PZA和LFX分别在48~6000 ng·mL^-1(r=0.9988)、480~60000 ng·mL^-1(r=0.9993)、120~15000 ng·mL^-1(r=0.9995)内表现出良好的线性关系。INH、PZA和LFX 3种药物的日内和日间精密度均低于15%,且3种药物的提取回收率均处于97.21%~107.80%之间。7例受试者体内均检测到药物INH,质量浓度分别为44.74、120.1、301.5、481、595.5、1220及1570 ng·mL^-1;PZA的质量浓度分别为104.2、6273.34和3185 ng·mL^-1;1例受试者检出LFX,质量浓度为199.86 ng·mL^-1。结论本试验建立了痰液中INH、PZA及LFX的检测方法,具有灵敏度高、测定结果准确、快速等诸多优点,可以应用于临床治疗药物的监测。     

半伸膝位髌旁关节外入路髓内钉内固定治疗胫骨干骨折

目的探讨半伸膝位髌旁关节外入路髓内钉内固定治疗胫骨干骨折的疗效。方法2018 年 7 月—2019 年 9 月，应用半伸膝位髌旁关节外入路髓内钉内固定治疗 22 例胫骨干骨折患者。男 15 例，女 7 例；年龄 25～68 岁，平均 46.4 岁。致伤原因：摔伤 7 例，交通事故伤 14 例，重物砸伤 1 例。闭合性骨折 16 例，开放性骨折 6 例。胫骨干骨折 AO 分型：42-A1 型 4 例，42-A2 型 2 例，42-A3 型 3 例，42-B2 型 3 例，42-B3 型 4 例，42-C1 型 2 例，42-C2 型 3 例，42-C3 型 1 例。合并腓骨骨折 20 例。受伤至手术时间 2～15 d，平均 7.5 d。记录骨折愈合时间、术后并发症及膝前痛发生情况，末次随访时采用 Lysholm 评分评价膝关节功能。结果手术时间 50～140 min，平均 85 min。术后 2 例切口有渗出，经对症处理后愈合；其余患者切口均Ⅰ期愈合。患者均获随访，随访时间 8～23 个月，平均 14.9 个月。X 线片复查示骨折均愈合，愈合时间 12～20 周，平均 14.4 周。4 例（18.18%）患者出现膝前痛。随访期间均未出现髌股关节不稳定表现。末次随访时，膝关节功能 Lysholm 评分为 85～100 分，平均 94.3 分。结论半伸膝位髌旁关节外入路髓内钉内固定治疗胫骨干骨折，既能对骨折有效固定，又能避开髌下入路植钉存在的骨折端再次移位、多发膝前痛等问题，是一种有效的治疗方法。     

臀部筋膜脂肪瓣修复坐骨结节和大转子复发性窦道型压疮

目的总结臀部筋膜脂肪瓣修复坐骨结节、大转子复发性窦道型压疮的效果。方法2018 年 2 月—2019 年 6 月，收治 12 例 13 处长期截瘫伴坐骨结节、大转子复发性窦道型压疮患者。其中男 10 例 11 处，女 2 例 2 处；年龄 46～56 岁，平均 51 岁。截瘫 10～20 年，平均 13 年；所有患者均有压疮手术史，术后 3 个月～12 年复发。其中坐骨结节处压疮 11 例，坐骨结节合并大转子处压疮 1 例。创面清创、切除窦道假性滑液囊，采用单侧或双侧臀部筋膜脂肪瓣填塞窦道，术区一期缝合闭合切口。结果术后 13 处压疮切口均Ⅰ期愈合，局部无红肿、渗液，术后 14 d 拆线出院。术后局部平坦，外观理想。术后患者均获随访，随访时间 8～24 个月，平均 14 个月。随访期间压疮均无复发。结论臀部脂肪组织丰富，利用筋膜脂肪瓣修复坐骨结节、大转子复发性窦道型压疮设计、操作简便，临床效果良好。     

踇甲皮瓣联合腓动脉穿支皮瓣游离移植再造拇指并修复足部供区 15 例

目的总结应用踇甲皮瓣再造拇指及腓动脉穿支皮瓣游离移植修复足部供区的手术方法及临床效果。方法2016 年 6 月—2018 年 5 月，应用踇甲皮瓣联合腓动脉穿支皮瓣游离移植再造拇指并修复足部供区 15 例。男 10 例，女 5 例；年龄 21～48 岁，平均 34.6 岁。致伤原因：重物压砸伤 7 例，机器绞伤 5 例，电锯切割伤 3 例。Ⅰ度缺损 9 例，Ⅱ度缺损 6 例。入院至皮瓣手术时间 4～7 d，平均 5.2 d。结果术后踇甲皮瓣及腓动脉穿支皮瓣全部成活，切口均Ⅰ期愈合。患者均获随访，随访时间 8～24 个月，平均 16.4 个月。末次随访时，再造拇指指甲生长平整，有光泽，指腹饱满；足部皮瓣外形良好，颜色及质地接近受区。根据中华医学会手外科学会拇手指再造功能评定标准，获优 9 例、良 6 例；根据 Maryland 足功能评分标准，获优 10 例、良 5 例。患者行走步态正常，无跛行及疼痛不适。结论踇甲皮瓣修复拇指Ⅰ、Ⅱ度缺损，再造拇指可获得良好外观及功能；腓动脉穿支皮瓣具有血供可靠、血管恒定、易切取等优点，可有效修复足部供区。     

活性多酚化合物LM49对RAW264.7巨噬细胞极化的影响

目的初步探讨LM49(2,4'三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮)对脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)M1/M2极化的影响及其调控机制。方法四曱基偶氮唑蓝(MTT)法测定LM49对细胞活力的影响;流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Westem-blot法测定LM49(5,10,20μmol·L^-1)与LPS/INF-γ共同作用于RAW264.7细胞后,巨噬细胞亚型标志物的表达情况及对核因子(NF)-κB和JAK/STAT信号通路的影响。结果与LPS/INF-γ造模组相比,LM49显著抑制CD16/32^+细胞数及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)4和肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA的表达,升高CD206^+细胞数及Arg-1和IL-10 mRNA的表达,且降低巨噬细胞M1/M2的比值;Westem-blot法验证LM49可显著降低TLR4、Myd88、NF-κB和STAT1蛋白的表达量,同时抑制p-JAK2和p-STATl蛋白磷酸化水平。结论LM49通过抑制TLR4-Myd88-NF-κB和JAK2-STAT1信号通路,抑制巨噬细胞Ml型极化及促进巨噬细胞M2型极化,调节巨噬细胞M1/M2的平衡。     

穴位埋线对肾虚血瘀型子宫内膜异位症患者IL-1β、TNF-α、VEGF和MMP-2水平的影响

目的:基于PI3K/Akt/mTOR信号通路,探讨穴位埋线疗法治疗肾虚血瘀型子宫内膜异位症的临床疗效及对IL-1β、TNF-α、VEGF和MMP-2等相关信号通路下游细胞因子的水平的影响。方法:选取肾虚血瘀型子宫内膜异位症的门诊和住院患者86例,按照随机数字表法随机分为穴位埋线组和西药组,西药组口服孕三烯酮胶囊(内美通),穴位埋线组在西药组的基础上采用穴位埋线进行治疗,治疗3个月后观察两组患者的临床疗效和IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-2等相关信号通路下游细胞因子的水平。结果:治疗后穴位埋线组总有效率93.02%(40/43),西药组总有效率83.72%(36/43),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后,穴位埋线组和西药组的VAS评分、血清IL-1β、TNF-α、VEGF和MMP-2水平均较治疗前改善(P<0.01),但穴位埋线组较西药组改善更为明显(P<0.05或P<0.01)。治疗过程中,西药组不良反应发生率为18.60%(8/43),穴位埋线组不良反应发生率为4.65%(2/43),两组不良反应发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:穴位埋线可以显著改善子宫内膜异位症患者的临床症状和体征,并能显著降低孕三烯引起的不良反应,可见穴位埋线疗法可以作用PI3K/Akt/mTOR信号通路,通过改善通路下游的IL-1β、TNF-α、VEGF和MMP-2水平,发挥治疗子宫内膜异位症的作用。     

五味子醇甲对APP/PS1小鼠学习记忆和NF-κB p65的影响

目的研究五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和NF-κB p65的影响。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型(APP/PS1)组、五味子醇甲(SCH+APP/PS1)组;另以同背景同月龄的C 57 BL/6 J阴性小鼠为空白(WT)组。SCH+APP/PS1组给予SCH悬浊液灌胃(2.6 mg·kg^-1·d^-1),模型组和空白组给予等量蒸馏水灌胃。各组灌胃30 d进行Mirror水迷宫空间探索试验后取材。HE染色法观察皮层及海马CA1区神经细胞的形态结构。运用DCFH-DA法检测脑组织活性氧(ROS)含量。Western印迹检测法检验磷酸化核转录因子(NF-κB p65,pp65)的表达。结果与APP/PS 1组相比,APP/PS 1+SCH组有效区停留距离及时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);APP/PS 1+SCH组穿越有效区次数和平台区停留距离增加,均差异有统计学意义(P<0.01)。APP/PS 1+SCH组HE染色观察皮层有部分神经细胞萎缩、减少,较APP/PS1组明显好转,海马细胞排列整齐度尚可、较均匀。与APP/PS1组相比,APP/PS1+SCH组能降低ROS含量,差异有统计学意义(P<0.05)。APP/PS 1+SCH组皮层及海马pp65蛋白相对表达量下调(P<0.05,P<0.01)。结论SCH可能通过降低ROS含量和抑制pp65保护脑组织形态结构和提高APP/PS1鼠空间探索记忆能力。     

Chronological Changes in Neutrophil/lymphocyte Ratio in Advanced Gastric Cancer Patients Treated with Nivolumab: a Report of Nine Cases

Background: Nivolumab has been approved for use in advanced gastric cancer (GC) after third-line chemotherapy in Japan. However, it remains difficult to predict favorable nivolumab response before treatment. Methods: We evaluated the clinical course with a focus on the chronological changes in neutrophil/lymphocyte ratio (NLR) throughout the chemotherapy and assessed the relationship between nivolumab response and chronological changes in NLR before nivolumab administration. Results: We experienced nine cases who received nivolumab monotherapy for unresectable advanced or postoperative recurrent GC. Nivolumab was used as third-line chemotherapy in all patients, and partial response (PR) and stable disease (SD) were observed in two patients each. Nivolumab treatment resulted in progressive disease (PD) in five patients. In patients with PR or SD, changes in the NLR tended to correspond to the response of target metastatic lymph nodes to first- and second-line chemotherapy. In the four cases with PR or SD following nivolumab, ∆NLRresponses that was the difference in the degree of decline during the most effective pretreatment chemotherapy were 1.39, 0.73, 1.62, and 1.22. However, the patients with PD showed lower ∆NLRresponses, at 0.66, 0.66, 0.25, 0.13, and -0.05 in the five cases. Mean ∆NLRresponses in the patients with PR or SD and patients with PD were 1.17 and 0.33, respectively (P = 0.0008). Conclusions: We experienced nine GC cases treated with nivolumab and assessed the association between chronological NLR changes throughout chemotherapy and tumor response to nivolumab. Changes in NLR during pretreatment chemotherapy might predict tumor response to nivolumab monotherapy in patients with advanced GC.     

Solid‐type poorly differentiated adenocarcinoma of the stomach: Deficiency of mismatch repair and SWI/SNF complex

ARID1A, one of the subunits in SWI/SNF chromatin remodeling complex, is frequently mutated in gastric cancers with microsatellite instability (MSI). The most frequent MSI in solid‐type poorly differentiated adenocarcinoma (PDA) has been reported, but the SWI/SNF complex status in solid‐type PDA is still largely unknown. We retrospectively analyzed 54 cases of solid‐type PDA for the expressions of mismatch repair (MMR) proteins (MLH1, PMS2, MSH2, and MSH6), SWI/SNF complex subunits (ARID1A, INI1, BRG1, BRM, BAF155, and BAF170) and EBER, and mutations in KRAS and BRAF. We analyzed 40 cases of another histological type of gastric cancer as a control group. The solid‐type PDAs showed coexisting glandular components (76%), MMR deficiency (39%), and complete/partial loss of ARID1A (31%/7%), INI1 (4%/4%), BRG1 (48%/30%), BRM (33%/33%), BAF155 (13%/41%), and BAF170 (6%/2%), EBER positivity (4%), KRAS mutation (2%), and BRAF mutation (2%). Compared to the control group, MMR deficiency and losses of ARID1A, BRG1, BRM, and BAF155 were significantly frequent in solid‐type PDAs. Mismatch repair deficiency was associated with the losses of ARID1A, BRG1, and BAF155 in solid‐type PDAs. In the MMR‐deficient group, solid components showed significantly more frequent losses of ARID1A, BRG1, BRM, and BAF155 compared to glandular components (P = .0268, P = .0181, P = .0224, and P = .0071, respectively). In the MMR‐proficient group, solid components showed significantly more frequent loss of BRG1 compared to glandular components (P = .012). In conclusion, solid‐type PDAs showed frequent losses of MMR proteins and the SWI/SNF complex. We suggest that loss of the SWI/SNF complex could induce a morphological shift from differentiated‐type adenocarcinoma to solid‐type PDA.     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨大黄素保护AR42J胰腺腺泡细胞损伤的作用机制

目的基于JAK2/STAT3信号通路探讨大黄素保护AR42J胰腺腺泡细胞损伤的作用机制。方法将AR42J细胞以1×10~5/mL铺于6孔板,分为对照组、雨蛙素组(雨蛙素10~(-8) mol/L)、大黄素组(终浓度0.25、0.5、1.0mg/L),通过碘-淀粉比色法淀粉酶(AMS)试剂盒测定细胞上清淀粉酶活力水平,确定雨蛙素刺激AR42J胰腺腺泡细胞损伤的收样时间;ELISA法检测TNF-α活力;Western blot法分析JAK2/STAT3通路相关蛋白的表达情况。结果①与对照组比较,雨蛙素组中的AMS、TNF-α、JAK2/STAT3通路相关蛋白表达量显著提高,差异有统计学意义(P0.05)。②与雨蛙素组比较,大黄素各干预组可显著降低雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞损伤的淀粉酶活力、TNF-α含量、JAK2和STAT3的mRNA相对表达量,差异有统计学意义(P0.01)。③大黄素0.5、1.0 mg/L干预组的作用优于0.25 mg/L干预组,差异有统计学意义(P0.001)。结论大黄素能够减轻雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞损伤,其作用机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路有关。